實驗目的
1、 熟悉酶免疫技術(shù)基本原理和方法、免疫熒光技術(shù)的基本原理。
2、 了解酶聯(lián)免疫吸附實驗（間接法）的基本過程及其作用。
目前應用zui多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔）上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成復合物。洗滌后加入酶標記的特異性抗體，后者通過抗原也結(jié)合到載體的表面。洗去過剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時間內(nèi)經(jīng)酶催化產(chǎn)生的有色產(chǎn)物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上，然后加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成復合物。洗滌后加酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。洗滌后加底物顯色，有色產(chǎn)物的量與抗體的量成正比。（見圖5-1）
常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP），相應的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，后者為藍色。可用目測定性，也可用酶標儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量。
實驗六 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELASA）
ELASA是一種用酶標記抗原或抗體，在固相反應板上進行抗原抗體反應的方法。常用于檢測體液中的微量抗原和抗體，具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、容易判斷等優(yōu)點。其檢測方法、注意事項、結(jié)果分析等詳見檢測試劑的說明書。本實驗以雙抗體夾心法為例檢測乙型肝炎病毒表面抗原介紹如下：
實驗目的
要求了解試驗原理，試驗方法及結(jié)果分析。
實驗材料
1．標本：待檢人血清
2．試劑：酶標抗體（抗HBs）、HBsAg陽性對照血清、陰性對照、洗滌液、顯色劑A、B，終止液
3．器材：已被抗體包被的微量反應板（48孔）、微量移液管、酶標儀等。
實驗內(nèi)容與方法
1．在微量反應板每孔加入待檢標本50μl，設陽性、陰性對照各2孔，每孔加入陽性（或陰性）對照各1滴，并設空白對照1孔。
2．每孔加入酶結(jié)合物1滴（空白對照除外），充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。
3．棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。
4．每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育15分鐘。
5．每孔加終止液1滴，充分混勻。
6．用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。
實驗結(jié)果與評價
樣品OD值≥2.1陰性對照平均OD值，判斷為陽性，否則為陰性。陰性對照OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。
