考馬斯亮藍G250測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態下呈紅色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G250結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度范圍為0～1 000μg/mL，最小可測2.5μg/mL蛋白質，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。

　　

　　考馬斯亮藍G250是由于與蛋白質的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質含量的測定。

　　

　　考馬斯亮藍G250測定蛋白質含量流程：

　　該方法用于大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

　　1、Bradford濃染液的配制：將100mg考馬斯亮藍G250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸餾水補充至200ml，此染液放4℃至少6個月保持穩定。

　　2、標準曲線蛋白質樣本的準備：盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標準蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標準曲線。

　　3、將待測樣本溶于緩沖溶液中，該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同。

　　4、按1：4用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉淀，過濾除去。

　　5、每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質結合后，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min。

　　6、根據標準曲線計算待測樣本的濃度。